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小鼠ELISA試劑盒基于抗原抗體特異性結合原理,采用雙抗體夾心法等檢測模式。先將特異性抗體包被在微孔板形成固相抗體,加入待測樣本后,目標抗原與固相抗體結合,再加入酶標記的檢測抗體,形成“固相抗體-抗原-酶標抗體”復合物。洗滌去除未結合物質后,加入底物(如TMB),酶催化底物顯色,顏色深淺與抗原量正相關。用酶標儀測定吸光度,通過標準曲線計算抗原濃度。 1.樣本準備:推薦使用血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細胞上清或組織勻漿等樣本類型。血清/血漿樣本采集后應立即離心,取上清分裝保存于-80℃,避免反復凍融;組織樣本需在冰浴中勻漿,使用預冷的生理鹽水或RIPA緩沖液,勻漿后同樣離心取上清。所有樣本在使用前需恢復至室溫并充分混勻。 2.試劑準備:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水準確稀釋至工作濃度,現配現用。標準品按說明書梯度稀釋,建議使用多通道移液器以提高一致性。酶結合物與顯色液需避光保存,使用前平衡至室溫并輕柔混勻。 3.加樣操作:在酶標板上設置標準品孔、待測樣品孔和空白孔。標準品孔按照特定順序進行稀釋和加樣,確保每孔加樣量準確。待測樣品孔先加樣品稀釋液,再加待測樣品,輕輕晃動混勻。加樣時應將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁。 4.溫育與洗滌:用封板膜封板后置37℃溫育一定時間。溫育結束后,小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置一段時間后棄去,重復多次,拍干。 5.加酶與再次溫育洗滌:每孔加入酶標試劑(空白孔除外),重復溫育和洗滌步驟。 6.顯色與終止:每孔先加入顯色劑A,再加入顯色劑B,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色。顯色適當時,每孔加終止液終止反應。 7.測定:以空白孔調零,在特定波長下測量各孔的吸光度值。根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。 小鼠elisa試劑盒
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