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標題: 色譜柱的活化與維護 [打印本頁]
作者: ninali    時間: 2024-9-19 14:54
標題: 色譜柱的活化與維護
　　色譜柱作為高效液相色譜儀的主要部件，其性能直接影響到被測物質的分離與測定效果。因此，色譜柱的活化與維護是確保分析結果準確性、重復性及色譜柱長期穩定運行的重要環節。
　　一、色譜柱的活化目的
　　1、去除雜質：活化能夠去除色譜柱內殘留的溶劑、水分以及低沸點雜質，這些雜質可能影響后續分析的準確性，導致峰形畸變、基線漂移。
　　2、提高惰性：通過活化，減少色譜柱對樣品組分的吸附或化學反應的可能性，從而提高色譜柱的惰性，使得分析結果更加可靠。
　　3、增強熱穩定性：對于氣相色譜而言，活化過程有助于提升固定液在高溫下的穩定性和耐久性，有利于長期穩定運行。
　　4、恢復柱效：對于長時間未使用或經過多次分析后性能下降的色譜柱，活化是恢復其初始分離效能的有效手段。
　　5、延長使用壽命：定期且正確的活化維護可以顯著延長色譜柱的使用壽命，降低因污染或性能衰退導致的頻繁更換成本。
　　二、色譜柱的活化步驟
　　1、反相色譜柱
　　初始沖洗：使用甲醇或乙腈（兩者都是常用的有機溶劑）沖洗色譜柱，沖洗體積通常是柱體積的20至30倍，以潤濕固定相，去除可能存在的污染物或殘余溶劑。
　　過渡沖洗：如果流動相中含有緩沖鹽，需用與流動相中鹽濃度相等比例的超純水和有機相（如甲醇或乙腈）進行混合沖洗，沖洗量也是柱體積的20至30倍。這有助于平穩地將柱子從純有機相轉移到含水的流動相環境。
　　平衡：完成過渡沖洗后，繼續用最終的流動相平衡色譜柱，直到壓力基線穩定。如果基線不穩定，應延長平衡時間。
　　2、正相色譜柱
　　對于新的正向色譜柱，僅需要使用正己烷或異丙醇沖洗色譜柱，沖洗體積也是柱體積的20至30倍，最后按方法流動相平衡色譜柱。
　　3、離子交換色譜柱
　　新柱先用甲醇或乙腈沖洗20個柱體積，然后轉換到適合的離子強度和pH值的流動相進行平衡。
　　特殊功能化反相柱
　　如氨基柱、氰基柱等，如果原本保存在正相流動相中，轉為反相使用時，需先用異丙醇或乙醇沖洗50-100個柱體積，以轉換其相態。
　　三、色譜柱的日常保存
　　反相柱：應保存在甲醇或乙腈中。
　　正相柱：可保存在異丙醇或正己烷中。
　　離子交換柱：可保存在甲醇，或大于40%的有機相中，避免使用緩沖鹽保存。
　　四、色譜柱的清洗和再生
　　1、反相C18色譜柱
　　清洗：每天柱子使用完后，立刻沖洗。如果使用緩沖液，必須先用相同比例的有機相/水沖洗20個柱體積，然后再轉換到有機相沖洗20個柱體積。
　　再生：用水、甲醇、甲醇、水分別沖洗20個柱體積，在第一次用水時，進樣5次200μL二氯亞砜DMSO。
　　2、正相色譜柱
　　清洗：每次清洗都用低流速起步，先用10柱體積不含添加劑的流動相中的弱溶劑（如正己烷、氯仿）反沖色譜柱，再用20柱體積的強溶劑（如二氯甲烷或異丙醇）反沖色譜柱。
　　再生：用四氫呋喃、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷、正己烷分別沖洗20個柱體積。
　　3、離子色譜柱
　　清洗：用水沖洗30個柱體積去除鹽，然后用甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中。
　　再生：先用高濃度鹽的緩沖液清洗，然后再用水洗、乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。

作者: 無藥可救    時間: 2024-9-19 19:58
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作者: 唯有一劍    時間: 2024-9-19 23:40
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作者: 又到周末啦    時間: 2024-9-20 04:37
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